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技術(shù)文章

小鼠血清白蛋白(ALB)ELISA試劑盒實驗操作

點擊次數(shù):14502   發(fā)布時間:2022/6/28 16:22:05

【產(chǎn)品名稱】
中文名稱:小鼠血清白蛋白(ALB)酶聯(lián)免疫試劑盒

【包裝規(guī)格】
96T/盒

【預期用途】
僅供科研使用,本試劑盒用于測定小鼠血清樣本中血清白蛋白(ALB)含量。

【檢測原理】
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠血清白蛋白(ALB)水平。用純化的小鼠血清白蛋白(ALB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清白蛋白(ALB),再與HRP標記的血清白蛋白(ALB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清白蛋白(ALB)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠血清白蛋白(ALB)濃度。
【產(chǎn)品性能】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣(如有漏氣,不影響使用)。
2、劑量反應曲線線性
標準品劑量反應曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900。
3、檢測范圍
20μg/mL -500μg/mL。
4、靈敏度
低檢出劑量小于5μg/mL。
5、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示。CV(%) = SD/mean×100
批內(nèi)差:取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批間差:選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定,每個樣本使用同一試劑盒重復測定10 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內(nèi)差: CV<6.4%
批間差: CV<8.9%
6、回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍和平均回收率。
7、線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。

8、特異性
本試劑盒識別天然和重組小鼠血清白蛋白(ALB),經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應。由于受到技術(shù)及樣本來源的限制,不可能完成所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應檢測,因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應。
9、穩(wěn)定性
經(jīng)測定,試劑盒在有效期內(nèi)務必按推薦溫度保存,活性降低率小于5%。為減小外部因素對試劑盒破壞后檢測值的影響,實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致,尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
【操作步驟】
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜
5.置30后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10-20分鐘。
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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